細胞培養專題——6孔板接種和換液 ?。?)問:我的細胞傳代很正常,但一種到六孔板里(不管加藥和對照),總有兩三個孔(隨機)細胞長得不好,很小,像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點
答:可能跟你加液的溫度有關。如果你細胞剛剛拿出來換液加液,培養基也是從4度冰箱拿出來不久,很容易細胞就會凍死了。建議你最好把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。
另外,跟你細胞的生長狀態也有關。加藥之前的細胞可以用高點的血清濃度培養。保證細胞狀態良好。
或者放在37度水浴鍋里孵育也可以,或者是培養板本身的問題,你再換換其他培養板試試看。再有可能就是細胞狀態問題了,種板時的血清濃度調高試一下
?。?)問:最近幾天,我用六孔培養板接種細胞,培養24小時后更換培養基,在更換培養基之前,顯微鏡觀察到細胞貼壁,狀態非常的好,更換了培養基后,立即用顯微鏡觀察,發現每個孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態。細胞變得非常小,產生大量的碎片,而另一半的細胞一切正常,異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺,上半個圓是好的,下半個圓就不好,這是怎么一回事?
答:你可以看一下是不是培養板沒放水平。有一回我也出現過這種情況。你的培養液如何,如果培養液過期,細胞就不會貼壁。換一點新配制的培養液試一試。我也經常碰到,我想可能是板的問題,換一個牌子的板或換用培養瓶就沒問題了。不知樓主所需換液的培養板多不多,換培養基的時候如果沒有注意風機的影響,特別是所需換液的培養板很多時,容易使細胞因風吹失水而干縮破裂。如果如此,換液時應該逐個培養板進行,別怕浪費吸管,注意操作的效率!